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食品中亞硝酸鹽含量測定試劑盒說明書

點擊次數：601 發布時間：2021/6/2 15:35:46

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詳細介紹：

食品中亞硝酸鹽含量測定試劑盒說明書

微量法 100T/96S

注意：正式測定之選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

在食品中，亞硝酸鹽可與肉品中的肌紅素結合而更安定，在食品加工業中作為保色劑，以維

持肉制品的良好外觀，并防止肉毒梭狀芽孢桿菌的產生，提高食用肉制品的安全，但是人體

長期攝入亞硝酸鹽過量的食品，可誘發消化系統癌變。

測定原理：

在酸性條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸反應生成重氮化合物，再與 N-1-萘基乙二胺形成

紫紅色偶氮化合物，在 540nm 處有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀器：

天平、研缽或勻漿器、水浴鍋、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液一：液體 50 mL×1 瓶，室溫保存。

提取液二：液體 50 mL×1 瓶，室溫保存。

提取液三：液體 50 mL×1 瓶，室溫保存。

粉劑四：粉劑 100 mg ×1 支，室溫保存。

試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。

樣品處理：

稱取樣品約 0.2g 鮮重或 0.05g 干重，破碎，加入 0.5 mL 提取液一，沸水浴 15min，冷卻至

室溫，加入 0.5 mL 提取液二，震蕩搖勻，加 0.5 mL 提取液三，用鑷子加少量粉劑四（約 1

mg），靜置 30min，25℃，8000g 離心 15 min，取上清液待測。

測定步驟和操作表：

1、分光光度計/酶標儀預熱 30min，調節波長至 540nm，蒸餾水調零。

2、操作表

測定管空白管
蒸餾水（µL）   70
樣品（µL）   70
試劑一（µL）   65   65
試劑二（µL）   65   65
混勻，25℃靜置 15min，于微量石英比色皿/96 孔板中檢測 540nm 處吸光值 A。 △A=A 測定 - A 空白

注意：空白管只需測定一次。

亞硝酸鹽含量計算：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

標準曲線回歸方程為：y=0.234x + 0.0002，R2= 0. 999 x 為標準品亞硝酸鈉濃度（μg/ml） y

為吸光值 A。

NO2-（μg/g）=（△A-0.0002）÷0.234×V 樣÷（V 樣÷V 樣總×W）×0.6668

=（A – 0.086）÷0.234×1.5×0.6668÷W

=4.27×（△A-0.0002）÷W

V 樣總：加入提取液體積，1.5 mL； V 樣：反應中樣品體積，0.07mL；W：樣品質量，g。

b.用 96 孔板測定的計算公式如下標準曲線回歸方程為：y=0.141x +0.095，R2= 0. 9991 x 為標準品亞硝酸鈉濃度（μg/ml） y

為吸光值 A。

NO2-（μg/g ）=（△A-0.0002）÷0.141×V 樣÷（V 樣÷V 樣總×W）×0.6668

=（△A-0.0002）÷0.141×1.5×0.6668÷W

=7.09×（△A-0.0002）÷W

V 樣總：加入提取液體積，1.5 mL； V 樣：反應中樣品體積，0.07mL；W：樣品質量，

g。

注意事項：

1.試劑盒 2-8℃保存。

2.試劑對人體有一定的危害，請穿實驗服，戴手套操作。

3.若檢測出得 OD 值在標準曲線范圍外，請將樣品進行適當的濃縮或稀釋（A540 <0.09 濃

縮，A540 > 1.5 適當稀釋）。

4.低檢出限為 0.5μg/g。

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