液體樣本甘油含量檢測試劑盒:在ATP存在下甘油被甘油激酶磷酸化為3-磷酸甘油,再被甘油磷酸氧化酶氧化產生過氧化氫;在過氧化物酶作用下生色底物轉化為苯醌亞胺,其光密度值與甘油濃度成正比。
甘油濃度測定:
參見下表進行加樣。為使反應時間盡量一致,減小實驗誤差,可先加入標準品、待測樣品,然后再加入工作溶液。(注意:當甘油濃度較低時,可將待測樣品與工作溶液按照100µl:100µl體積混合,然后再進行測定,但是如果樣品體積超過100µl時將會稀釋工作液中酶濃度,使反應靈敏度下降。如果待測樣品濃度超過線性范圍,可進行適當稀釋,然后根據稀釋倍數來計算樣品中甘油濃度。)
37ºC或25ºC反應 10分鐘。反應平衡后顏色在60分鐘內穩定。
先用蒸餾水+工作液空白管調零,然后測定各管OD值。
繪制標準曲線并計算甘油濃度。
附Excel作圖步驟:各標準管OD值為y軸,標準品濃度為x軸。(1)鼠標左鍵圈住數據,點擊做圖向導,選擇-散點圖-,點擊-完成-。(2)鼠標右鍵點圖上某一點,點擊-添加趨勢線-,點擊-選項-,點擊-顯示公式-和-R2值-。
說明:
1、維生素C>0.18g/L、血紅蛋白>2g/L、膽紅素>0.25g/L、二硫蘇糖醇、巰基乙醇、高濃度EDTA干擾測試。
2、正常血清甘油濃度為20-130µmol/L,細胞培養時須用不含酚紅無色無血清培養基,如果培養基中含有酚紅,可以選擇含有酚紅無細胞培養基作為對照進行測定
強堿條件下甘油和二價銅絡合物顯絳藍色,所以利用甘油這個特性就可以輕松搞定。主要試劑是AR甘油、氫氧化鈉、硫酸銅。向氫氧化鈉堿化甘油溶液里加硫酸銅,一定要保證甘油被完全絡合,并且保證多余二價銅都以氫氧化銅沉淀形式存在,但是氫氧化鈉也不要加太多。甘油銅可見區大吸收波長是在630nm。先作個標準系列,繪出吸光度-濃度曲線,然后把待測試樣吸光度測出來在標準曲線上一算,濃度就得到了。
液體樣本甘油含量檢測試劑盒